عنوان کار آموزی : بررسی الگوی مقاومت ضد میکروبی و مطالعه مولکولی در سویه هایAcinetobacter baumannii جدا شده از بیمارستان های ته

عنوان کار آموزی : بررسی الگوی مقاومت ضد میکروبی و مطالعه مولکولی در سویه هایAcinetobacter baumannii جدا شده از بیمارستان های تهران - عنوان کار آموزی بررسی الگوی مقاومت ضد میکروبی و مطالعه مولکولی در سویه هایAcinetobacter baumannii جدا شده از بیمارستان های تهران دانشکده علوم گروه میکروب شناسی پایان نامه کارشناسی ارشد برای دریافت درجه کارشناسی ارشد MSc گرایش میکروب شناسی

---

فهرست مطالب

عنوان................................................................................................................................................................... صفحه

چکیده................................................................................................................................................................. 1

مقدمه................................................................................................................................................................... 3



فصل اول: کلیات

1-1- تاکسونومی.............................................................................................................................................. 7

1-2- شناسایی بیوشیمیایی و مورفولوژیکی Acinetobacter ...................................................... 9

1-3- اپیدمیولوژی........................................................................................................................................... 9

1-3-1- کپسول............................................................................................................................................... 10

1-2-3- پیلی یا فیمبریه............................................................................................................................... 11

1-3-3- لیپوپلی ساکارید (LPS)................................................................................................................ 11

1-3-4- سیدروفورها...................................................................................................................................... 12

1-3-5- Quorum sensing.................................................................................................................. 12

1-3-6- توکسین وآانزیم............................................................................................................................... 13

1-4- بیماری زایی........................................................................................................................................... 13

1-4-1- عفونت مجاری تنفسی................................................................................................................... 14

1-4-2- باکتریمی Acinetobacter...................................................................................................... 16

1-3-4- مننژیت.............................................................................................................................................. 17

1-4-4- عفونت مجاری ادراری.................................................................................................................... 18

1-4-5- عفونت های Acinetobacter در کودکان............................................................................ 18

1-4-6- بروز عفونت Acinetobacter در مناطق غیر معمول........................................................ 19

1-5- فاکتورهای مربوط به گسترش عفونت Acinetobacter....................................................... 20

1-6- اهمیت مقاومت انتی بیوتیکی در Acinetobacter.............................................................. 22

1-6-1- مهمترین نگرانی های افزایش شیوع مقاومت.......................................................................... 23

1-7- حساسیت در برابر انتی بیوتیک ها................................................................................................. 24

1-7-1- بتالاکتام ها (مهارکننده ها سنتز دیواره).................................................................................. 24

1-7-1-1ساختمان بتالاکتام........................................................................................................................ 24

1-7-1-2- انواع بتالاکتام ها........................................................................................................................ 25

1-7-1-2-1پنی سیلین ها........................................................................................................................... 25

1-7-1-2-2- پنی سیلین های وسیع الطیف......................................................................................... 26

1-7-1-2-3- پیپراسیلین............................................................................................................................. 26

1-7-1-2-4- تیکارسیلین............................................................................................................................ 26

1-7-1-2-5- سفالوسپورین ها................................................................................................................... 26

1-7-1-2-5-1- نسل اول........................................................................................................................... 27

1-7-1-2-5-2- نسل دوم............................................................................................................................ 27

1-7-1-2-5-3- نسل سوم......................................................................................................................... 28

1-7-1-2-5-4- نسل چهارم....................................................................................................................... 28

1-7-1-2-5-5- نسل پنجم......................................................................................................................... 28

1-7-1-2-6- کارباپنم ها.............................................................................................................................. 29

1-7-1-2-7- مونوباکتام ها.......................................................................................................................... 29

1-7-1-3- مکانیسم عمل انتی بیوتیک های بتالاکتام........................................................................ 30

1-8- مقاومت باکتریایی................................................................................................................................. 30

1-8-1- آنزیم های بتالاکتاماز..................................................................................................................... 32

1-8-1-1- طبقه بندی انزیم های بتالاکتاماز.......................................................................................... 32

1-8-1-1-1- بتالاکتامازها به طور معمول بر 2 اساس عمومی طبقه بندی می شوند............... 32

1-8-1-1-1-1- طبقه بندی بر اساس جایگاه فعال آنزیم.................................................................. 33

1-8-1-1-1-1-1- سرین بتالاکتامازها.................................................................................................... 33

1-8-1-1-1-1-2- متالوبتالاکتامازها........................................................................................................ 33

1-8-1-1-1-2- طبقه بندی بر اساس سرولوژی و هیدرولیز سوبسترا........................................... 34

1-8-1-1-1-3- طبقه بندی بر اساس خصوصیات عملکردی........................................................... 34

1-8-1-1-3-1-گروه اول.............................................................................................................................. 35

1-8-1-1-1-3-2- گروه دوم...................................................................................................................... 35

1-8-1-1-3-2-1- 2a................................................................................................................................. 35

1-8-1-1-1-3-2-2-2b ........................................................................................................................... 35

1-8-1-1-1-3-2-3- 2be......................................................................................................................... 35

1-8-1-1-1-3-2-4- 2br......................................................................................................................... 36

1-8-1-1-1-3-2-5- 2c............................................................................................................................ 36

1-8-1-1-1-3-2-6- 2d............................................................................................................................ 36

1-8-1-1-1-3-2-7- 2e............................................................................................................................ 36

1-8-1-1-1-3-2-8-2f.............................................................................................................................. 36

1-8-1-1-1-2-3- گروه سوم..................................................................................................................... 36

1-8-1-1-1-3-4- گروه چهارم................................................................................................................. 37

1-8-2- منشا ژنتیکی انزیم های بتالاکتاماز............................................................................................ 37

1-8-2-1- مکانیسم و زنتیک مقاومت به بتالاکتام ها.......................................................................... 38

1-8-2-1-1- مقاومت با تولید آنزیم های بتالاکتاماز............................................................................ 39

1-8-2-1-1-1- تولید سفالوسپوریناز به صورت ذاتی......................................................................... 39

1-8-1-1-1-2- بتالاکتامازهای وسیع الطیف........................................................................................ 39

1-8-2-1-1-3- متالوبتالاکتامازها.............................................................................................................. 39

1-8-1-2-1-4- اگزاسیلینازها.................................................................................................................... 40

1-9-1- مطالعات مربوط به PCR............................................................................................................ 42

1-9-2- کاربردهای PCR........................................................................................................................... 45

10-1- روش های شناسایی باکتری Acinetobacter...................................................................... 46

1-10-1- آزمون اکسیداز.............................................................................................................................. 46

1-10-2- آزمون کاتالاز................................................................................................................................. 47

1-10-3- تست MRVP............................................................................................................................ 47

1-10-4- هیدرولیز اسیدآمینه آرژنین..................................................................................................... 48

1-10-5- تست حرکت و اندول در محیط SIM.................................................................................. 48

1-10-16- تست TSI.................................................................................................................................. 49

1-10-7- تست OF...................................................................................................................................... 49

1-10-18- تست سیترات............................................................................................................................ 50

1-10-9- تست اوره آز................................................................................................................................. 50

1-10-10- تشخیص سویه های Acinetobacter با روش API20E..................................... 51

1-11- روش های مولکولی شناسایی Acinetobacter................................................................... 51

1-11-1- استخراج DNA به روش جوشاندن.................................................................................... 51

1-11-2- PCR (Polymerase Chain Reaction).............................................................. 52

1-11-2-1- الکتروفورز محصول PCR................................................................................................... 54

1-11-2-2- روش تهیه ژل آگارز و انجام الکتروفورز........................................................................... 55

1-11-2-3- تهیه اتیدیوم بروماید.............................................................................................................. 55

1-12 مروری بر مطالعات انجام گرفته.............................................................................. 56

فصل دوم: مواد و روش ها

2-1- نمونه گیری............................................................................................................................................ 58

2-2- جداسازی و شناسایی Acinetobacter..................................................................................... 58

2-3- روش کار کیت API.......................................................................................................................... 60

2-4- اندازه گیری مقاومت به روش دیسک دیفیوژن............................................................................ 60

2-5- تهیه استاندارد MacFarland...................................................................................................... 63

2-6- انجام آزمون Duplicate-PCR جهت تکثیر ژن oxa-51 , oxa-23.......................... 63



فصل سوم: نتایج

3-1- جداسازی سویه های Acinetobacter...................................................................................... 67

3-2- آزمون های تعیین حساسیت دارویی............................................................................................ 68

3-2-1- آنتی بیوگرام به روش دیسک دیفیوژن ................................................................................... 68

3-2-2- الگوی مقاومت آنتی بیوتیکی....................................................................................................... 70

3-3- آزمون PCR......................................................................................................................................... 71

3-3-1- PCR جهت شناسایی ژن های oxa-23 و oxa-51....................................................... 71



فصل چهارم: بحث

بحث..................................................................................................................................................................... 74

4-1- نتیجه گیری........................................................................................................................................... 79

4-2-پیشنهادات............................................................................................................................................... 82

منابع..................................................................................................................................................................... 84

چکیده انگلیسی................................................................................................................................................ 93

فهرست جداول

2-1- تست های بیوشیمیایی لازم برای شناسایی Acinetobacter........................................... 59

2-2- استانداردهای حساسیت و مقاومت آنتی بیوتیکی...................................................................... 62

3-2- PCR Mixture مورد استفاده جهت تکثیر ژن های oxa-51, oxa-23.................... 64

3-1- درصد مقاومت آنتی بیوتیکی به روش دیسک دیفیوژن.......................................................... 68

3-2- الگوهای مقاومت آنتی بیوتکی Acinetobacter..................................................................... 71



فهرست تصاویر

1-1- ساختار هسته آنتی بیوتیک های بتالاکتام................................................................................... 25

2-1- غیر فعال شدن انتی بیوتیک بتالاکتام .......................................................................................... 32

3-1- مراحل یک چرخه کامل PCR....................................................................................................... 43

4-1- محصولات Duplicate-PCR ژن های oxa.......................................................................... 72





فهرست نمودارها

1-3- توزیع فراوانی Acinetobacter در جدایه های بالینی.......................................................... 67

3-2-درصد مقاومت به آنتی‌بیوتیک‌های مختلف در
Acinetobacter......................................... 69
چکیده

Acinetobacter باکتری گرام منفی بوده و به شاخه پروتئوباکتر تعلق داشته است. Acinetobacter از مهمترین ارگانیسم های خاک بوده که گاهی از کشت های حاصل از پوست، غشاء مخاطی و ترشحات انسان نیز بدست می آمده است. A. baumannii از پاتوژن های فرصت طلب مهم به شمار می رفته و عامل انواع عفونت های بیمارستانی محسوب می شده است. از آنجایی که این باکتری قادر است در محیط بیمارستان به مدت طولانی زنده بماند، شانس انتقال عفونت ناشی از آن در بین بیماران افزایش می یابد. درمان عفونت های ناشی از Acinetobacter اغلب به دلیل مقاومت بالای این باکتری به بسیاری از آنتی بیوتیک ها از جمله کرباپنم ها (ایمی پنم و مروپنم) با مشکل مواجه شده است.
از جمله مکانسیم های ایجاد مقاومت به آنتی بیوتیک های بتالاکتام تولید بتالاکتامازها می باشد، که از این میان می توان به اگزاسیلینازها که در هیدرولیز کرباپنم ها نقش دارند اشاره کرد. هدف از این تحقیق بررسی الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی، شیوع ژن های کد کننده آنزیم های اگزاسیلیناز در میان جدایه هایA. baumannii جدا شده از بیمارستان های تهران می باشد. تعداد 70 جدایه A. baumannii از بیمارستان های تهران جمع آوری گردید. این سویه ها با استفاره از تست های بیوشیمیایی تعیین هویت گردیده و با سیستم API2ONE تایید شدند. از مجموع 60 جدایه بررسی شده، 7/8% (5 سویه) از جدایه های خون، 7/3% جدایه های ادرار (2سویه)، 10% (6 سویه) از جدایه های زخم، 6/6% جدایه های خلط (4 سویه) و 71% از تراشه (43سویه) جداسازی شدند. مقاومت آنتی بیوتیکی سویه ها به روش Disk Diffusion نسبت به آنتی بیوتیک های مختلف سنجیده شد. تشخیص ژن های مقاومت دارویی با روش PCR[1] صورت گرفت. با توجه به نتایج آنتی بیوگرام، میزان مقاومت سویه های A. baumannii نسبت به آنتی بیوتیک های مورد بررسی به ترتیب زیر می باشد: آمیکاسین (98%)، تیکارسیلین (95%)، جنتامیسن (93%)، سفتریاکسون (98%)، سفکسیم (100%)، سفتازیدیم (98%)، سیپروفلوکساسین (55%)، ایمی پنم (72%)،مروپنم (72%)، کلیستین (5%). نتایج تست حساسیت ضد میکروبی حاکی از مقاومت چندگانه در سویه ها بود و 12 الگوی مقاومت آنتی بیوتیکی مختلف در بین ایزوله ها مشاهده شد.
مطابق با نتایج PCR، گسترش ژن های مقاوم 23-oxa،51- oxa به ترتیب 85% و 100% بود. تمام سویه های حامل ژن 23-oxa، حامل ژن 51-oxa بودند در واقع گونه A. baumannii شناسایی شدند چون این ژن خاص گونه A. baumannii است. شیوع A. baumannii مقاوم به بتالاکتام ها بین بیماران بیمارستانی در جهان رو به افزایش است که نتایج به دست آمده از این تحقیق این امر را تایید می کند. از طرف دیگر قابلیت انتقال ژن های مقاومت از طریق عوامل ژنتیکی متحرک مانند پلاسمیدهای کانژوگاتیو و اینتگرون ها در افزایش شیوع مقاومت در بین باکتری های مهم بیمارستانی بسیار حائز اهمیت است. لذا شناسایی مکانیسم های مقاومت برای به کارگیری کنترل و تجویز داروهای موثر، گامی مهم در جلوگیری از گسترش سویه های مقاوم به شمار می رود.

پرداخت و دانلود

مشخصات فروشنده

نام و نام خانوادگی : مجتبی خادم پیر

شماره تماس : [phone]

ایمیل :[e-mail]

سایت :payfile.org

مشخصات فایل

فرمت : docx

تعداد صفحات : 167

قیمت : برای مشاهده قیمت کلیک کنید

حجم فایل : 9433 کیلوبایت

برای خرید و دانلود فایل و گزارش خرابی از لینک های روبرو اقدام کنید...

پرداخت و دانلودگزارش خرابی و شکایت از فایل

اثرات بهداشتی ناشی ازکاربرد سموم شامل جهش زایی سرطان زایی و اثرات بر جنین

پاورپوینت اثرات بهداشتی ناشی ازکاربرد سموم شامل جهش زایی-سرطان زایی و اثرات بر جنین - اثرات بهداشتی ناشی ازکاربرد سموم شامل جهش زایی سرطان زایی و اثرات بر جنین

---

سم آفلاتوکسین
جهش زایی Mutagenicity
عبارت است از القا آسیب DNA و تغیرات ژنتیکی.
جهش های ژنی:
تغییرات در توالی DNA در یک ژن هستند.
اصولا بر اساس تغییراتی که در فنوتیپ ایجاد می کنند تشخیص داده می شوند.
دو دسته ی عمده ی جهش های ژنی عبارتند از:

1-جانشینی جفت باز

2-جهش های فریم شیفت (Framshift)
مقاله شامل:
نا هنجاری های کروموزومی
آناپولوییدی و پلی پولوییدی
عوامل جهش زایی DNA
حذف نوکلیوتید : معمول ترین مکانیسم ترمیم در تمام ارگانیسم ها است.
بررسی نقش داروها وترکیبات شیمیایی در تولید نقایص Tratogenicity زمان تولد (ناقص الخلقه زایی)
شکاف کام و شکاف لب
سایردارو ها و موادشیمیایی دارای قابلیت تراتوژنی
سرطانزایی ناشی از سموم carcinogenicity
سم آفلاتوکسین:
آفلاتوکسین ها توسط دو گروه قارچ ها تولید می شوندوروی غلات و آجیل ها رشد می کنندو به دلیل سمی بودن می توانند سبب کاهش و سرکوب سیستم ایمنی سرطانزایی و جهش زایی وحتی مرگ شوند.و به وسیله ی خوردن غذاهای آلوده و استنشاق وارد بدن شده با عبور از روده ی کوچک جذب خون میشوند و در بافت های مختلف تجمع می یابند.

قیمت فقط5,000 تومان پرداخت و دانلود

مشخصات فروشنده

نام و نام خانوادگی : مجتبی خادم پیر

شماره تماس : [phone]

ایمیل :[e-mail]

سایت :payfile.org

مشخصات فایل

فرمت : ppt

تعداد صفحات : 34

قیمت : 5,000 تومان

حجم فایل : 138 کیلوبایت

برای خرید و دانلود فایل و گزارش خرابی از لینک های روبرو اقدام کنید...

پرداخت و دانلودگزارش خرابی و شکایت از فایل